Tutaj prezentujemy metod? kolorymetryczn? chlorku glinu, bezpo?redni? technik? analityczn? do ilo?ciowego oznaczania flawonoidów w nagietku. Podej?cie to wykorzystuje prost? reakcj? chemiczn? polegaj?c? na traktowaniu ekstraktu z nagietka odczynnikiem chlorku glinu, tworz?c kolorowy kompleks. Intensywno?? koloru, oceniana za pomoc? spektrofotometrii, koreluje ze st??eniem flawonoidów.

W naszym badaniu wykorzystano dost?pn? i wiarygodn? metod? kolorymetryczn? do ilo?ciowego oznaczania ca?kowitej flawonoidów, u?atwiaj?c analiz? danych w laboratoriach fitochemicznych i wspieraj?c badania nad zwi?zkami o w?a?ciwo?ciach terapeutycznych.

Zawarto?? flawonoidów w nagietku jest badana podczas rozwoju kwiatów w celu okre?lenia optymalnego czasu zbioru i maksymalizacji jego potencja?u leczniczego i komercyjnego.

Nasz protokó? jest czu?? i wydajn? mikrotechnik?, która umo?liwia ilo?ciowe oznaczanie flawonoidów przy u?yciu ma?ych ilo?ci próbek, optymalizacj? u?ycia rozpuszczalników, a analiza materia?u ro?linnego jest ograniczona.

[Instruktor] Na pocz?tek susz materia? ro?linny w piekarniku z wymuszonym obiegiem powietrza w temperaturze 40 stopni Celsjusza przez 48 godzin. Po wyschni?ciu wyjmij go z piekarnika, przenie? wysuszony materia? do papierowych kopert i przechowuj w ciemno?ci w temperaturze pokojowej. Zamro? materia? ro?linny za pomoc? ciek?ego azotu, aby przygotowa? si? do mielenia. Nast?pnie zamro?ony materia? nale?y zmieli? w mo?dzierzu porcelanowym, a? uzyska jednolit? konsystencj?. Przygotowa? próbki, wa??c 25 miligramów sproszkowanego materia?u z ka?dej próbki. Do zwa?onego materia?u doda? 500 mikrolitrów 80% metanolu. Aby wyekstrahowa? flawonoidy, inkubuj mieszanin? w temperaturze 70 stopni Celsjusza przez godzin?. Po inkubacji odwirowa? mieszanin? o st??eniu 731 g przez 13 minut. Teraz przygotuj podwielokrotno?ci, bior?c 150 mikrolitrów otrzymanego ekstraktu i dodaj?c do niego 37 mikrolitrów 80% metanolu. We? 50 mikrolitrów ekstraktu i dodaj 100 mikrolitrów jednego molowego octanu potasu i 100 mikrolitrów 10% chlorku glinu. Uzupe?nij roztwór, zwi?kszaj?c ca?kowit? obj?to?? mieszaniny do pi?ciu mililitrów za pomoc? wody destylowanej. Ustaw d?ugo?? fali absorbancji spektrofotometru na 415 nanometrów i zmierz absorbancj? roztworu. Wygeneruj krzyw? kalibracyjn?, przygotowuj?c roztwory kwercetyny w zakresie od 50, 100, 175 i 350 miligramów na mililitr. Aby przygotowa? próbki kalibracyjne, nale?y odpipetowa? 500 mikrolitrów roztworu kwercetyny z ostatniego punktu krzywej kalibracyjnej i doda? do roztworu 100 mikrolitrów 10% chlorku glinu i 100 mikrolitrów jednego molowego octanu potasu. Nast?pnie dodaj 1,5 mililitra 80% metanolu i 2,8 mililitra wody destylowanej. Pozostaw roztwory kalibracyjne na 40 minut w temperaturze pokojowej. Ustaw d?ugo?? fali absorbancji spektrofotometru na 415 nanometrów i zmierz absorbancj? próbek kalibracyjnych, aby skonstruowa? krzyw? kalibracyjn?. Na koniec nale?y obliczy? st??enie flawonoidów i zawarto?? flawonoidów na gram suchej masy. Poni?sza tabela podsumowuje, w jaki sposób st??enie flawonoidów i produkcja flawonoidów na ro?lin? ró?ni? si? od pocz?tkowego tworzenia p?ków do pe?nego kwitnienia i rozwoju owoców w g?ówkach kwiatowych nagietka. Wy?sze poziomy ca?kowitego st??enia flawonoidów zaobserwowano mi?dzy stadiami ósmym i jedenastym, co odpowiada p?kom z oddzielonymi dzia?kami kielicha do w pe?ni otwartych g?ówek kwiatowych. We wcze?niejszych stadiach, takich jak p?ki ze zjednoczonymi dzia?kami, oraz w pó?niejszych stadiach, takich jak starzej?ce si? g?ówki kwiatowe, st??enia flawonoidów by?y o 22% do 27% ni?sze w porównaniu z w pe?ni otwartymi g?ówkami kwiatowymi. Rysunek ten przedstawia pomiar ca?kowitego st??enia flawonoidów w suchej masie g?ówek kwiatowych nagietka, kwiatów j?zyczkowatych i kwiatów rurkowych na ró?nych etapach rozwoju kwiatowego. Wyniki sugeruj?, ?e zrozumienie zmienno?ci st??enia flawonoidów mi?dzy ró?nymi strukturami i etapami kwiatowymi jest przydatne do okre?lenia optymalnego czasu zbiorów, aby zmaksymalizowa? zawarto?? flawonoidów w g?ówkach kwiatowych nagietka.